大家好，今天我们来讨论一下，我们经常提到的ROX是什么东西，以及它在RT-PCR中的功能是什么？
和FAM，VIC这样的数字荧光染料很像，ROX也是一种荧光分子，当它出现在反应中时，实时PCR仪器可以检测到它发出的信号值。
但是，与其他那些染料不同，ROX是一种被动的染料，这也意味着它的荧光值水平不会因为随DNA的扩增而发生改变，而是一直保持在一个稳定的水平上。
现在，问题来了，为什么我们要设置这样一种稳定的染料，它有什么作用？
实际上，在任何RT-PCR系统中，有几个潜在的来源会激发报告基团，从而形成‘本底’。实际上，任何检测系统也都有这个问题。这些因素包括：
➤ 不均匀的照明；
➤ 各孔光学的轻微变化；
➤ 凝结量的差异。
ROX在这里就起到一个扣除本底的作用，它会对这些和其他变异源进行归一化处理，并在此过程中提高了数据的精确度，这就像我们在Elisa试剂当中要设计阴性对照一样。